adaid.ru

В крови кроликов много базофилов (от 4 до 12 %). Непрямой тест ставится на изолированных базофилах кроликов. Кровь с гепарином, взятая из ушной вены кролика, центрифугируется в узких пробирках в течение 5 мин со скоростью 300 об/мин. Затем отсасывается беловатая лейкоцитарная пленка, которая образуется между плазмой и эритроцитами. Предварительно готовятся предметные стекла с красителем, для чего на предметное стекло наносят каплю 0,3 % спиртового раствора нейтрального красного. На подсохший краситель наносят каплю (0,05 мл) сыворотки больного, каплю базофильной пленки (кроличья) и каплю аллергена.

Параллельно ставят контроли с аллергеном без сыворотки больного и с сывороткой, но без аллергена. Предметное стекло после осторожного помешивания смеси накрывают покровным и подсчитывают базофилы.

О результатах реакции судят по числу дегранулированных базофилов (под микроскопом при ув. 600). Подсчитывают 20 или 40 клеток в различных полях зрения. Из них учитывают число измененных базофилов. Результат выражается в процентах.

При показателе более 10—15 % тест считается положительным. Процент дегранулированных базофилов в контроле не должен превышать 2—3 %.Положительная реакция свидетельствует о наличии повышенной чувствительности к тому или иному аллергену, а отрицательный результат не исключает ее.Тест дегрануляции тучных клеток соединительной ткани. При исполнении теста Шелли приходится сталкиваться с рядом трудностей: получение хорошей лейкоцитарной пленки, взятие крови у одного и того же кролика не чаще 1 раза в неделю, нестойкость базофилов, склонность их к спонтанной деструкции.

В связи с этим в последнее время все шире применяется тест с тучными клетками крысы.Для проведения исследования необходимо получить взвесь тучных клеток.

Интактная крыса забивается путем обезглавливания. Внутрибрюшинно вводится 5—7 мл изотонического раствора натрия хлорида или раствора Тироде, подогретого до 37 °С. Проводится легкий массаж брюшка в течение 15 мин. Затем брюшная полость вскрывается и содержимое ее стекает в пробирку, нагретую до 37 °С и смоченную гепарином.

Полученную взвесь, содержащую тучные клетки, необходимо держать в термостате при 37 °С все время исследования.До начала опыта, который ставится аналогично тесту Шелли, необходимо посмотреть 1 препарат (взвесь тучных клеток, нанесенную на предварительно окрашенное нейтральным красным предметное стекло) под микроскопом. Если в препарате много спонтанно дегранулированных тучных клеток, то тучные клетки этой крысы использовать в опыте нельзя.

Оценка теста производится, как в предыдущем тесте (Шелли) по проценту измененных тучных клеток, но подсчитывается большее количество клеток (50—100). Положительным считается тест больше 10 %, при отсутствии деструкции в контролях (0—3 %).В противоположность предыдущему существует тест торможения прямой дегрануляции тучных клеток.Этот тест ставится с тучными клетками крысы, предварительно сенсибилизированными. В реакции участвуют сенсибилизированные тучные клетки перитонеальной жидкости крыс, исследуемая сыворотка и аллерген.

Взвесь сенсибилизированных тучных клеток наносят на заранее окрашенное нейтральным красным предметное стекло, добавляют каплю (0,05 мл) специфичного аллергена. Получается прямой тест дегрануляции тучных клеток. Реакцию читают через 10—15 мин стояния в термостате.

Подсчитывают процент дегранулированных клеток. Далее берут серии предметных стекол, на каждое из которых наносят одно из разведений исследуемой сыворотки, каплю аллергена и каплю сенсибилизированных тучных клеток крысы. Подсчитывают процент дегранулированных клеток.

Результаты сравнивают с предыдущими данными (прямого теста). За титр принимают разведение сыворотки больного, способное тормозить дегрануляцию тучных клеток предварительно сенсибилизированного животного.