Реакция микроагглютинации
В 1932 г. Baskin для определения иммунологических взаимоотношений между супругами предложил тест микроагглютинации. По этой методике доказывается присутствие специфических антител в сыворотке крови женщины или мужчины. Методика со временем была несколько изменена (Kibrik, 1952; Papasov, Entshew, 1963).Papasov, Entshew (1963), используя метод микроагглютинации, обнаружили антитела у женщин в 18,8% наблюдений.
Franklin и Dukes (1964) в случаях относительного бесплодия констатировали наличие циркулирующих в крови антител по методике микроагглютинации в 78,9% наблюдений. В 1966 г. Bandhauer при обследовании 498 мужчин по методике Кибрика у 29 обнаружил положительный тест агглютинации спермиев.
Fjallbraht (1965) приводит данные обследования теста Кибрика у 263 мужчин, состоящих в бесплодном браке, причем у 3,4% были обнаружены антитела. Фактор агглютинации или иммобилизации семенных нитей вполне может обусловливать отсутствие проникновения спермиев через цервикальный канал.
Fjallbraht (1968) приводит интересные данные обследования довольно большого числа пациентов. Он рассматривает три группы: 1) мужчины, состоящие в бесплодном браке (400 наблюдений), 2) мужчины, состоящие в «плодовитом» браке (500 наблюдений), 3) группа без определенного отбора — мужчины — доноры крови (500 наблюдений). Во всех трех группах мужчины были примерно одного возраста.
О наличии аутоантител Fjallbraht судил по тесту Кибрика и в 36 наблюдениях была прослежена проба Шуварского—Гунера. В результате исследований наличие антител в сыворотке крови мужчин этих трех групп выявлено соответственно в 6,8; 2,6 и 4,8% случаев. По данным автора, проводившего тщательное урологическое обследование мужчин, наличие аутоантител чаще констатировалось при поражении testis воспалительного характера.
По Baskin, сыворотку крови обследованной женщины смешивали со спермиями мужа и по наличию агглютинации семенных нитей судили о сенсибилизации организма супруги. По Kibrik, эякулят разбавляют физиологическим раствором так, чтобы в 1 мл его было 40 млн. спермиев (подвижных семенных нитей).
Приготовленную таким образом сперму смешивают с равным объемом 10% раствора желатины. Затем часть этого антигена смешивают с равным объемом сыворотки крови исследуемой женщины.
Сыворотка может применяться в различном разведении: 1 : 2, 1 : 4 и т. д. Реакцию проводят в пробирках, которые помещаются в термостат при температуре 37° на 2 часа. Затем через каждые 30 минут определяют под микроскопом процент подвижных спермиев и наличие конгломератов агглютинированных семенных нитей.Термин «микроагглютинация» — вряд ли можно считать вполне подходящим для данной методики, так как в основном наблюдается лишь снижение активности движения спермиев в реакции по сравнению с контролем.
В своей работе мы использовали реакцию микроагглютинации в модификации Енчева. Определение вели следующим образом. Брали 3—5 мл крови из вены и сразу (центрифугированием) отделяли сыворотку.
На 5 предметных стеклах готовили следующие варианты: 1) каплю суспензии из спермиев супруга, в 1 мл которой должно быть около 20 000 000 семенных нитей (контроль); 2) капля суспензии из спермиев другого мужчины той же концентрации (контроль); 3) каплю сыворотки жены, хорошо смешанной с каплей суспензии семенных нитей супруга (опыт); .4) каплю сыворотки — обследуемой женщины с суспензией спермиев другого мужчины (контроль); 5) каплю сыворотки крови другой женщины, смешанной с каплей суспензии обследуемого супруга (контроль).Края покровного стекла смазывали парафином (последнее исключало быстрое высыхание капли). Все препараты выдерживали в термостате при 37° в течение 6 часов.
За это время каждые 30 минут под микроскопом производили подсчет процента подвижных спермиев во всех препаратах. Проба считалась положительной в том случае, если в препарате № 3 произошло значительное снижение подвижности семенных нитей по сравнению с остальными контрольными. Чем быстрее наступала иммобилизация спермиев, тем выше был титр антител в сыворотке крови.
По Horky (1968), для констатации антител, рассматриваемых как причина бесплодия, в течение первых 6 часов в третьем препарате должна наступить полная иммобилизация спермиев при сохранении их подвижности в контроле.Для приготовления суспензии по Енчеву производят центрифугирование эякулята с последующим его разбавлением физиологическим раствором так, чтобы в 1 мл раствора содержалось 20 000 000 спермиев. Для более точной дифференциации титра антител можно пользоваться сывороткой крови в различном ее разведении.
При решении вопроса о результатах пробы мы отмечали снижение подвижности в препарате № 3 по сравнению с контролями. Реакция микроагглютинации из 228 женщин была положительная у 44 (19,3%), причем у 18 —резко положительная, у 147 (64,5%)—отрицательная, у 37 (16,2%)—сомнительная. Из 228 мужчин она была положительной у 15 (6,6%), причем у 8—резко положительная, у 143 (62,7%)—отрицательная и у 70 (30,7%)—сомнительная.
Подробный анализ полученных результатов приведен в следующей главе.При наступающем полном обездвиживании спермиев в опыте (26 случаев), что чаще определялось в течение первых 2 часов наблюдения, при сохранении подвижности в контролях мы говорили о резко положительной пробе. Положительным результат считали в том случае, если в течение первых 2 часов активная подвижность (при нормоспермии) в опыте снижалась более чем на 20% или более 50% за 6 часов при сохранении лучшей подвижности в контролях.
Решение данного вопроса было затруднительным в случаях патологии эякулята, когда вообще в первые 3—6 часов после эякуляции всегда наступает акиноспермия (обездвиживание). Все сказанное выше объясняет Довольно большой процент сомнительных результатов, особенно в случаях патологии спермы. Вообще же, по нашему мнению, для решения вопроса о результате реакции микроагглютинации достаточно просмотра в течение первых 2 часов, ибо мы не наблюдали изменения диагнозов в зависимости от просмотров препарата после 2 часов предварительного наблюдения, когда в опыте и контроле подвижность чаще всего значительно нарушалась.
В заключение следует сказать, что реакция микроагглютинации является довольно субъективным тестом, а методика ее проведения довольно трудоемкой.