adaid.ru

При изучении гемолитической активности ядов у различных животных (и у людей) установлена наибольшая чувствительность к яду (1 : 2000) эритроцитов цельной крови морских свинок (30,6%) и кроликов (28,5%); менее чувствительны эритроциты обезьяны (13,2%), человека (6,9%), лошади (3,4%); эритроциты овцы оказались устойчивыми к действию яда. Чувствительность отмытых эритроцитов к 5% суспензии яда составляла у человека 96%, у обезьяны 86,9%, у лошади 79,3%, у морских свинок 78,5%, у кроликов 62%; эритроциты овец оказались нечувствительными.Для количественного определения гемолитической активности яда взвесь эритроцитов с плазмой и ядом в барбиталовом буфере инкубируют 2 ч при температуре 37°С, затем центрифугируют в течение 3 мин при 1800 оборотах и в надосадочной жидкости фотометрически измеряют количество свободного гемоглобина. Расчет ведут на половину гемолитической единицы, т. е. количество яда (в мкг/мл), вызвавшее лизис 50% эритроцитов. Упрощенным считается метод Д. Н. Сахибова и Я. Д. Давлятова (1968): суспензию эритроцитов, расплавленную в 1% агаре, выливают на стеклянную пластинку слоем в 1—2 мм, накладывают диски из хроматографической бумаги, пропитанные растворами ядов, и инкубируют в течение 12—24 ч при температуре 37°С; общую гемолитическую активность яда оценивают по ширине обесцвеченной зоны вокруг дисков.

Гемолитическую активность ядов различных змей, определенную таким способом, можно представить в следующем порядке: яд кобры, щитомордника, песчаной эфы, степной гадюки и гюрзы.Сфероцитоз эритроцитов, наблюдаемый при отравлении ядом палестинской гадюки, объясняется трансформацией эритроцитов и некоторым усилением внутритканевого гемолиза.

При этом прямой гемолиз не происходит даже при значительной дозе яда. Непрямой гемолиз Gitter и соавт. (1959) объясняют влиянием фракций А-4 и А-5, содержащих фосфолипазу; сфероцитоз, по их мнению, возникает и в нормальной плазме.

Это процесс ферментативный, скорость его зависит от концентрации яда: при концентрации яда 50 мкг/мл он достигает максимума через 2 ч, а при 200 мкг/мл — через 15 мин. Между тем сфероцитоз нельзя считать предфазой гемолиза, так как повышение дозы яда не приводит к гемолизу. Этому препятствуют белки крови, ибо только при снижении их концентрации в плазме может возникнуть гемолиз эритроцитов.

Сфероцитоз обусловлен, по-видимому, каким-то плазменным фактором, но не лизолецитином (Gitter е. а., 1959).Повышение содержания билирубина в сыворотке крови до 12,48—24,96 мг% (по Бокальчуку) и уробилина в моче, наблюдаемое у людей при укусе гадюковыми змеями, свидетельствует о гемолитическом действии яда. Нередко, обычно при тяжелом отравлении, а иногда и при отравлении средней тяжести, наблюдается анизо-пойкилоцитоз, что согласуется с данными Г. И. Цобкалло (1941); при введении яда гюрзы в дозе 0,01 мг/кг объем эритроцитов увеличивался в 17г раза, а при введении 0,5—1 мг/кг с уменьшением объема эритроцитов постоянно нарастал их гемолиз. Чувствительность отмытых эритроцитов к гемолитическому действию яда в 2000 раз меньше, чем неотмытых.

Гемолиз объясняется изменением пограничного слоя протоплазмы эритроцитов, ведущим к выходу гемоглобина в плазму. При введении подопытным животным яда щитомордника в дозе 0,1 мг/кг Г. А. Медникян (1945) через 10—20 мин наблюдал гемолитический эффект при увеличении размера эритроцитов в 2 раза. Однако in vitro он отсутствовал.Количество прямого гемолизина в ядах разных змей различно: в яде Haem. haemachatus оно составляет 8—9% ; из 100 мг яда кобры получено 5,88 мг препарата, содержащего 6—5% гемолизина.

Удельная активность кристаллического гемолизина яда В. fasciatus в 2 раза ниже, чем яда N. naja. Яд кобры, угнетая поглощение кислорода в тканях мозга и мышцах, изменяет проницаемость клеточных мембран и, увеличивая выход аминоферазы, способствует полному гемолизу эритроцитов (Meldrum, Thompson, 1962). Лизирующий эффект прямого гемолизина яда среднеазиатской кобры оказался сильнее эффекта цельного яда. Прямого гемолизирующего действия фосфолипаза А не оказывает, но в сочетании с гемолитическим фактором резко усиливает его эффективность (Д. Н. Сахибов и др., 1972). По данным Oldigs и соавт. (1971), фосфолипаза А яда индийской кобры в 100 раз усиливает влияние прямого литического фактора.