Реакция двойной микродиффузии в агаре

В связи с тем что спермии содержат несколько антигенов (а со временем их будет, по-видимому, обнаружено несколько десятков), соединяющихся с соответствующими антителами, полос преципитации может быть несколько. В то же время следует учитывать, что антитела в антисыворотках и антигены в спермиях могут находиться не в эквивалентных отношениях и часть линий преципитации может не образовываться.Katsh и Matchael (1962) предложено много различных модификаций методики двойной диффузии (преципитации) в агаре. Дополнительные окраски значительно расширяют возможности опыта.

Авторы, беря в качестве антигена эякулят, использовали прокрашивание красным биоцином. Исследователи пришли к заключению, что линии преципитации были плохо видимыми и довольно быстро исчезали, в результате чего данные реакции оказывались сомнительными. Затем Katsh и Matchael использовали предварительное окрашивание антител 1% раствором кристаллического гематоксилина в пропорции 1 : 2. Эту смесь диализировали в мембранах диализа Visking в течение 12—24 часов.

При подобной обработке антител реакция заканчивается через 4 часа, а линии преципитации видны довольно четко.По данным Riko (1965), метод преципитации в агаре может быть вполне использован для определения антител по отношению к спермиям.

Dukes (1965) применял метод микроагглютинации и преципитации в геле, и, имея большое число наблюдений (487), сравнивал пять групп пациентов: 1) первично бесплодные супруги, стоящие на учете в американской ассоциации по бесплодию; 2) своеобразная контрольная группа, где при наличии бесплодия были известны причины, ведущие к нему (эндометриоз, миомы, ановуляторный цикл у женщин; патология спермы у мужчин); 3) группа пациентов, в семьях которых имелись дети («явно плодовитые»), 4) не «явно плодовитые». Эта группа состояла из женщин, состоящих в браке и предохраняющихся; 5) группа вторично бесплодных женщин, являющихся «на сегодня здоровыми».

Антитела у женщин по отношению к спермиям обнаружены соответственно в 67,2, 15,9, 9,1, 7,1 и 20,1%. Из приведенного материала видно, что наибольший процент выявления антител имеется в группе первично бесплодных женщин. Dukes, объединяя первую, вторую и пятую группы, куда входили только бесплодные, в среднем у 25 обнаружил наличие антител. По мнению автора, это говорит о большом значении рассматриваемого фактора в бесплодном браке.

Мы проводили реакцию двойной микродиффузии в агаре, используя для этого описанное выше специальное покровное стекло с пятью колодцами, а также предварительную обработку антигена 5,7% серной кислотой, а сыворотки крови и слизи цервикального канала—гематоксилином. При исследовании 228 женщин получены следующие результаты: с сывороткой крови реакция была положительной у 33 (16,7%), отрицательной — у 180 (78,9%), сомнительной — у 10 (4,4%), со слизью цервикального канала — соответственно у 40 (17,5%), 173 (75,9%) и 15 (6,6%). Совпадение (+) результатов по двум этим исследованиям обнаружено в 32 случаях. У мужчин преципитация с сывороткой крови была положительной в 7 наблюдениях (3,1 %).По нашему мнению, реакция двойной микродиффузии в агаре является вполне объективной для решения вопроса о возможной сенсибилизации.

Во всех случаях совпадения положительной реакции с сывороткой крови и слизью цервикального канала у женщин (32 случая), а также при определении ( + ) пробы с сывороткой крови у мужчин (7 случаев) мы считали, что, по-видимому, имеется сенсибилизация организма семенными нитями.При данном состоянии мы могли четко и объективно констатировать образование зон преципитации между антигеном в центре препарата и растворами по его периферии.